*****以下內(nèi)容轉(zhuǎn)載至國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心 于2026年5月27日 發(fā)布的公告****

 一、概述

  細胞外囊泡（Extracellular Vesicles,EVs）一般指由細胞釋放的具有脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的顆粒的統(tǒng)稱，其不具有自我復(fù)制能力。

  近年來，EVs藥物逐漸成為細胞衍生物類藥物、新型藥物遞送系統(tǒng)等研發(fā)領(lǐng)域的重要方向。

EVs藥物來源多樣（如人源干細胞、HEK293細胞、基因修飾細胞系等），一般經(jīng)細胞培養(yǎng)、上清收獲、濃縮純化等步驟生產(chǎn)制備，也可裝載核酸、小分子、活性肽、抗體等活性成分或靶向分子。常見的劑型包括注射劑、滴鼻劑、鼻噴劑、滴眼液、外用制劑等。其具有多種活性成分，作用機制復(fù)雜，不同類型EVs藥物可能存在不同程度的風險。因此，建議申請人基于EVs藥物設(shè)計和工藝特點，參考相關(guān)指導原則的質(zhì)量風險管理理念，科學利用風險評估工具，從藥物設(shè)計、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性等多方面進行風險評估，制定相應(yīng)的風險控制策略。

  現(xiàn)階段EVs的藥學研究技術(shù)仍處于快速發(fā)展階段，研發(fā)與評價體系亦在持續(xù)探索與完善過程中。本文基于當前科學認知、研究實踐及技術(shù)積累，針對人源細胞來源的EVs藥物臨床試驗階段藥學研究的共性問題，提出一般性技術(shù)要求，為藥品注冊申請人/上市許可持有人提供參考，對于其他來源或者具有特殊生產(chǎn)工藝的EVs藥物，經(jīng)評估適用可參考本文件。隨著該領(lǐng)域技術(shù)的發(fā)展與審評認知積累，相關(guān)內(nèi)容將不斷修訂與更新。對于其他復(fù)雜情形或隨著技術(shù)發(fā)展出現(xiàn)的新情況，鼓勵藥品注冊申請人/上市許可持有人與審評機構(gòu)進行溝通交流。

二、常見問題與解答

（一）臨床試驗樣品的生產(chǎn)用細胞基質(zhì)，在建庫、檢定和穩(wěn)定性研究等方面有何技術(shù)要求？

1. 生產(chǎn)用細胞基質(zhì)的總體要求

  EVs藥物的生產(chǎn)用細胞基質(zhì)可來源于原代細胞及具有細胞庫體系的細胞等，其來源應(yīng)合規(guī)，并應(yīng)符合相關(guān)倫理以及生物安全相關(guān)法律法規(guī)要求。考慮到生產(chǎn)用細胞基質(zhì)及其培養(yǎng)體系對 EVs藥物的質(zhì)量可能具有顯著影響，建議從適應(yīng)癥、產(chǎn)品特點、生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制等多角度進行科學論證，合理選擇生產(chǎn)用細胞基質(zhì)。生產(chǎn)用細胞基質(zhì)的建立、檢定與質(zhì)量控制應(yīng)遵循 ICH Q5D、ICH Q5A（R2）及《中國藥典》2025年版三部通則0234“生物制品生產(chǎn)用動物細胞基質(zhì)制備與質(zhì)量控制”的要求。為提高EVs藥物質(zhì)量的批間一致性，建議對EVs藥物的生產(chǎn)用細胞基質(zhì)開展單克隆篩選，并采用多種技術(shù)手段確證細胞的單克隆性。

  生產(chǎn)用細胞基質(zhì)的穩(wěn)定性是保障 EVs 藥物質(zhì)量持續(xù)穩(wěn)定的重要基礎(chǔ)。建議參照CH Q5A(R2)和ICH Q5B等相關(guān)要求，開展細胞傳代過程中的病毒安全性、遺傳穩(wěn)定性等研究，關(guān)注目的組分在傳代過程中的穩(wěn)定性等。鑒于細胞傳代代次可能影響EVs藥物的質(zhì)量，建議參考ICHQ5D要求初步確定體外限傳代次，評估生產(chǎn)周期內(nèi)細胞的表型穩(wěn)定性、遺傳穩(wěn)定性、干細胞關(guān)鍵特性（如多能性、分化潛能），以及生產(chǎn)EVs藥物能力的穩(wěn)定性等。建議探索建立細胞庫質(zhì)量與 EVs 藥物關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQAs）的關(guān)聯(lián)評價策略：除常規(guī)監(jiān)測細胞活力、倍增時間、細胞表型等指標外，還建議在設(shè)定的傳代節(jié)點及儲存時間點，考察所制備EVs藥物的粒徑、純度、生物學活性等QAs 是否持續(xù)符合預(yù)期要求，為生產(chǎn)工藝的穩(wěn)健性提供充分、科學的評價依據(jù)?？紤]到不同供者來源的細胞對 EVs藥物質(zhì)量的影響，建議采用單個供者來源的細胞，以保障 EVs藥物批間質(zhì)量一致性；若基于生產(chǎn)需要，確需采用多個供者來源的細胞進行EVs藥物的生產(chǎn)，應(yīng)對每個供者來源的細胞開展充分的研究和評估。如臨床試驗期間發(fā)生細胞供者變更，需開展充分的變更可比性研究以支持變更前后 EVs 藥物的質(zhì)量可比性。

 2.不同類型生產(chǎn)用細胞基質(zhì)的要求

  如生產(chǎn)用細胞基質(zhì)為原代細胞，對于免疫細胞等體細胞，可參考《免疫細胞產(chǎn)品藥學研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》開展研究；對于人源干細胞（如成體干細胞、誘導多能干細胞及其分化細胞），可參考《人源干細胞產(chǎn)品藥學研究與評價技術(shù)指導原則（試行）》開展研究。如生產(chǎn)用細胞基質(zhì)為具有細胞庫體系的細胞，應(yīng)明確細胞的來源、篩選過程等，建議結(jié)合 EVs 的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量研究等內(nèi)容，闡述克隆選擇依據(jù)。經(jīng)體外基因修飾的細胞，應(yīng)明確基因修飾方法，包括但不限于載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)導方式、克隆篩選過程等。此外，建議基于產(chǎn)品特點開展相應(yīng)研究，如基因修飾效率研究（基因轉(zhuǎn)導/表達效率等）、基因修飾相關(guān)風險控制（如，游離核酸/蛋白、致癌元件和具有致瘤能力的細胞衍生的 EVs等雜質(zhì)）和修飾后細胞的遺傳穩(wěn)定性研究、基因修飾對細胞表型和生物學特性的影響研究、目的基因表達情況和表達產(chǎn)物的生物學活性、裝載效率研究等。如采用病毒載體等對細胞進行基因修飾，應(yīng)開展細胞載體整合位點分析及拷貝數(shù)檢測，關(guān)注額外的病毒污染風險，例如由病毒載體引入的風險，以及復(fù)制型病毒污染的可能性。

（二）用于生產(chǎn)EVs藥物的其他原材料和輔料，應(yīng)符合什么要求？

  EVs藥物生產(chǎn)用的原輔料應(yīng)來源清晰。應(yīng)按照《中國藥典》2025年版三部通則0232“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料的質(zhì)量控制”的要求進行風險評估和控制，以提高藥物安全性并保障藥物質(zhì)量可控。為保障EVs藥物CQAs 持續(xù)穩(wěn)定，有效降低外源因子污染及工藝相關(guān)雜質(zhì)引入風險，EVs藥物生產(chǎn)全過程建議采用無動物源成分的細胞培養(yǎng)體系。原則上應(yīng)避免使用人血小板裂解液等人源生物來源添加組分；如果必需使用，應(yīng)開展充分的研究以證明使用的必要性和用量的合理性，建立完善的風險控制方案，并全面評估其對最終藥物組成、純度、生物學活性等的潛在影響，必要時對其攜帶的 Vs 進行含量控制或去除。對于培養(yǎng)基中細胞因子、激素、酶類等功能性添加物，如確需使用，應(yīng)明確其來源、質(zhì)量標準及質(zhì)量控制要求（包括純度、雜質(zhì)譜、外源因子等），并優(yōu)先選用非動物源的重組表達原材料；同時應(yīng)評估該類添加物對 EVs藥物分泌效率、組成特征及功能活性的影響，以及其在最終藥物中的殘留水平與相關(guān)安全風險。采用親和層析、免疫捕獲等工藝進行特定 EVs藥物的分離純化時，所使用的抗體、連接子、配體等親和材料，以及固相基質(zhì)等關(guān)鍵原材料，應(yīng)明確其來源、制備工藝及質(zhì)量控制標準。針對細胞來源物料及動物源性抗體，應(yīng)開展病毒安全性檢測及外源因子污染風險評估；并應(yīng)對細胞、抗體、配體等關(guān)鍵物料引入的細胞碎片、抗體和（或）配體殘留等工藝相關(guān)雜質(zhì)進行檢測與安全性風險評估，必要時在藥物質(zhì)量標準中設(shè)定相應(yīng)殘留可接受限值。用于EVs藥物生產(chǎn)的緩沖液、鹽類、密度梯度介質(zhì)、濾膜、層析填料等原材料，其質(zhì)量水平與適用范圍應(yīng)能夠保證生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性及藥物質(zhì)量的一致性，建議優(yōu)先選用符合現(xiàn)行藥典標準或在 GMP條件下生產(chǎn)的物料。此外，在條件允許時，鼓勵選用經(jīng)滅菌的一次性分離、純化原材料，采用單批次一次性使用模式，降低因清潔不充分、批次間交叉污染及材料老化等帶來的質(zhì)量風險，保障生產(chǎn)過程的可控性與穩(wěn)定性。對于裝載活性成分或靶向分子的EVs，其裝載的分子應(yīng)按照臨床試驗申報要求開展相關(guān)藥學研究，并對裝載工藝過程引入的試劑進行殘留檢測或安全性風險評估。

（三）對于EVs藥物的工藝開發(fā)，應(yīng)重點關(guān)注哪些方面？

  EVs藥物的原液生產(chǎn)工藝通常包括上游細胞培養(yǎng)上清收獲液制備和下游純化兩個工藝階段。

  EVs藥物上游工藝開發(fā)中，建議研究工藝對細胞生長性能、產(chǎn)物產(chǎn)量與質(zhì)量的影響，同時關(guān)注生產(chǎn)過程中EVs藥物CQA的表征研究?？紤]到細胞培養(yǎng)條件的變化可能顯著影響EVs藥物的表面標志物表達譜、活性成分組成及生物學活性等質(zhì)量屬性，因此建議參照 ICHQ8 等藥物研發(fā)指南，基于質(zhì)量源于設(shè)計（QbD）理念，開展深入的工藝研究，探索生產(chǎn)用細胞基質(zhì)的組學（如轉(zhuǎn)錄組，代謝組）變化與 EVs藥物CQAs的關(guān)聯(lián)。

  工藝研究中，建議關(guān)注細胞傳代次數(shù)、接種密度、細胞活力、溫度、pH、溶氧、培養(yǎng)基組成（如血清濃度及血清添加或去除策略）等工藝參數(shù)對 EVs藥物產(chǎn)量及質(zhì)量屬性的潛在影響。在EVs收獲環(huán)節(jié)，若需合并多批次或不同培養(yǎng)階段的上清液，應(yīng)對各批次/各階段細胞培養(yǎng)過程指標（如適用）與收獲液中間體質(zhì)量檢測結(jié)果開展一致性評估，基于評估結(jié)果，合理開展合批操作。對于裝載活性成分或靶向分子的EVs，其上游工藝開發(fā)中需明確裝載工藝步驟和原理，研究裝載工藝參數(shù)與裝載效率的相關(guān)性，評估裝載工藝對EVs結(jié)構(gòu)和功能的影響等。

  針對下游純化工藝開發(fā)，建議充分考量單一分離純化技術(shù)的固有局限性，鼓勵采用基于不同分離原理的組合式純化工藝，通過多技術(shù)協(xié)同純化，有效提升目標EVs藥物的純度與工藝回收率。針對除菌過濾環(huán)節(jié)，需關(guān)注EVs藥物粒徑與常規(guī)濾膜孔徑接近所引發(fā)的濾膜堵塞、顆粒截留及剪切力導致的EVs藥物結(jié)構(gòu)損傷等潛在風險，開展過濾工藝參數(shù)研究。必要時可采用全密閉生產(chǎn)工藝，結(jié)合基于工藝全過程控制的替代性工藝策略。此外，鑒于EVs藥物的粒徑、膜結(jié)構(gòu)等理化性質(zhì)與病毒等外源因子高度相近，對常規(guī)病毒滅活/去除工藝耐受性較差，下游工藝實現(xiàn)有效病毒清除有較大挑戰(zhàn)。因此建議遵循源頭控制原則，參照ICH Q5A（R2）等相關(guān)要求，加強對生產(chǎn)用細胞基質(zhì)、原材料及全工藝流程的外源因子污染控制，關(guān)注細胞庫和關(guān)鍵中間體（如未加工收獲液）的檢測控制，并結(jié)合藥物特性開展病毒安全性風險評估。

  制劑工藝開發(fā)應(yīng)保障EVs藥物在貯存、運輸及臨床使用 全流程中的物理化學穩(wěn)定性與生物學功能穩(wěn)定性。建議基于QbD 理念，系統(tǒng)開展制劑處方研究，選用組分明確、質(zhì)量可控、安全性風險低的輔料種類，并科學確定其適宜濃度。在處方篩選與優(yōu)化過程中，建議考察EVs藥物濃度、純度、膜完整性、粒徑分布、表面電荷及生物學活性等 CQAs 的變化趨勢，根據(jù)研究數(shù)據(jù)完善制劑處方，確保臨床試驗用樣品的質(zhì)量在貯存、運輸和使用過程中穩(wěn)定可控。

（四）臨床試驗用EVs藥物質(zhì)量研究的一般要求？

   EVs藥物作為高度復(fù)雜的多組分體系，具有多樣性、異質(zhì)性、復(fù)雜性等特點，在質(zhì)量研究中應(yīng)遵循基于風險、科學合理原則。在臨床試驗申報階段，建議根據(jù)EVs藥物質(zhì)量特性，基于成分分析、理化性質(zhì)、純度與雜質(zhì)、生物學活性及微生物安全性等方面進行研究，并結(jié)合非臨床與臨床研究數(shù)據(jù)初步確認關(guān)鍵質(zhì)量屬性。基于EVs藥物的特點和現(xiàn)有的檢測技術(shù)發(fā)展情況，建議采用具有不同原理的正交方法開展質(zhì)量研究，在質(zhì)量研究中納入具有工藝代表性的非臨床研究樣品、臨床試驗樣品，并鼓勵采用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法進行批間一致性的分析。質(zhì)量研究采用的研究方法應(yīng)提供選擇依據(jù)和詳細的方法描述，如樣品處理、關(guān)鍵參數(shù)設(shè)置、數(shù)據(jù)處理等，必要時應(yīng)提供方法開發(fā)和優(yōu)化的相關(guān)資料。

  成分分析：考慮到EVs 藥物組分較為復(fù)雜，并可能分布于EVs藥物表面和內(nèi)部，在臨床試驗申報階段建議采用先進的、靈敏的技術(shù)手段，如液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）、RNA 測序（RNA-seq）、實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qPCR）等，對 EVs藥物存在的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等相關(guān)分子進行系統(tǒng)定性與半定量/定量表征。應(yīng)關(guān)注工藝相關(guān)雜質(zhì)對成分分析檢測結(jié)果的影響，必要時采取適當?shù)那疤幚矸椒ㄟM行EVs的濃縮或雜質(zhì)去除?；诂F(xiàn)有科學認知，目前尚無適用于所有EV 藥物亞群的通用標志物，四跨膜蛋白(如CD9，CD63和CD81)和晚期內(nèi)體相關(guān)蛋白(如 TSG101和 Alix)是 EVs 藥物研究中常用的標志物，鼓勵基于早期質(zhì)量研究初步探索藥物特異性標志物，開展半定量/定量分析，同時對非囊泡相關(guān)成分進行半定量/定量分析。鼓勵采用納米流式等高分辨率單顆粒分析技術(shù)對囊泡亞群異質(zhì)性進行表征，為工藝優(yōu)化和質(zhì)量控制提供依據(jù)。

  理化特性分析：通常包括EVs藥物形態(tài)結(jié)構(gòu)、粒徑分布、顆粒濃度及表面電荷等研究。囊泡形態(tài)方面，建議采用高分辨率圖像分析方式（如冷凍電鏡、透射電鏡等）進行研究和確證。膜結(jié)構(gòu)完整性可考慮采用納米流式等方法開展研究。顆粒濃度通?？紤]作為劑量指標納入關(guān)鍵質(zhì)量屬性，根據(jù)樣品粒徑范圍和檢測方法的特點可考慮采用多種不同原理的檢測方法進行正交檢測。

  純度與雜質(zhì)研究：由于EVs藥物的組分復(fù)雜，較難在單一維度層面定義其純度，建議通過目標顆粒占比、特征標志物和雜質(zhì)水平等指標綜合描述。常用的純度指標包含顆粒數(shù)/總蛋白、完整顆粒/總顆粒數(shù)、功能性顆粒/總顆粒比值、目標分子的修飾效率、包封率、載藥率等。雜質(zhì)研究一般考慮藥物相關(guān)雜質(zhì)和工藝相關(guān)雜質(zhì)的識別和定量。其中，藥物相關(guān)雜質(zhì)通常包括結(jié)構(gòu)異常囊泡、不完整結(jié)構(gòu)囊泡、降解囊泡、游離的目標分子等。工藝相關(guān)雜質(zhì)包括非EVs 相關(guān)蛋白/核酸、來源于宿主細胞的高風險基因片段（如，HEK293細胞的E1A和SV40等）、細胞碎片/細胞器等和工藝引入雜質(zhì)，包括培養(yǎng)體系添加物（如血清、重組蛋白、抗生素、微載體等）、層析介質(zhì)配體、關(guān)鍵原材料引入的雜質(zhì)等。對于非EVs相關(guān)蛋白/核酸的檢測方法，如選用特定分子作為檢測靶標應(yīng)提供選擇依據(jù)。同時建議積累非EVs 相關(guān)DNA的片段大小檢測數(shù)據(jù)和高風險基因片段的拷貝數(shù)等。

  生物學活性分析：目前部分EVs藥物活性成分復(fù)雜，可能具有多重作用機制，如細胞增殖與遷移、凋亡調(diào)節(jié)、免疫調(diào)節(jié)、抗炎活性、組織修復(fù)相關(guān)信號通路活化等，鼓勵在早期研究階段多方位探索產(chǎn)品的潛在作用機制，并基于EVs 適應(yīng)癥相應(yīng)的作用機制，嘗試建立多維度的檢測體系，以充分描述其生物學活性特征，在研發(fā)早期盡可能的積累相關(guān)數(shù)據(jù)。對于裝載分子明確，作用機制清晰的EVs，應(yīng)基于其藥物設(shè)計和作用機制開展相關(guān)的生物學活性分析，初步確立量效關(guān)系，同時建議關(guān)注裝載分子本身的活性以及裝載完成后完整EVs的生物學活性。

  安全性分析：本文件中的安全性主要是指微生物污染和微生物代謝產(chǎn)物污染的研究，包括細菌、真菌、支原體、病毒、內(nèi)毒素等。應(yīng)遵循風險評估、全過程控制的原則，對細胞基質(zhì)和原輔材料中潛在的外源因子進行全面檢定和控制，生產(chǎn)過程采用合理的措施避免引入外源因子。同時，在工藝過程的適當步驟、原液和制劑階段開展細菌內(nèi)毒素、支原體、微生物限度/無菌檢測等。

（五）EVs藥物的顆粒濃度和粒徑表征研究應(yīng)如何開展？ 

  鑒于EVs藥物自身的異質(zhì)性和工藝的局限性，臨床試驗批次樣品的粒徑分布可能較寬。目前，常用于EVs 顆粒濃度和粒徑分布檢測的方法包括納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式細胞術(shù)（nanoFCM）、電阻脈沖傳感（如納米庫爾特粒度儀）等。由于不同檢測方法的原理存在差異，建議關(guān)注這些差異可能帶來的影響，例如對小尺寸顆粒的低估、顆粒聚集現(xiàn)象，或共分離雜質(zhì)對檢測結(jié)果的干擾。根據(jù)目標藥物的粒徑分布特點，選擇合適的檢測方法；必要時，可采用正交方法進行交叉驗證，并結(jié)合方法學對比研究及歷史批次數(shù)據(jù)，設(shè)定合理的接受標準。在檢測過程中，應(yīng)關(guān)注稀釋、濃縮、染色等樣品處理操作對EVs藥物質(zhì)量屬性的潛在影響，合理設(shè)置對照組，并對所采用的方法開展適用性評估。方法確定后，建議固定關(guān)鍵的測量參數(shù)以確保結(jié)果的可比性。由于 EVs 粒徑分布可能較寬，除報告平均粒徑、粒徑中位數(shù)外，還建議關(guān)注樣品中不同大小顆粒的分布及其變化趨勢，如 D10、D50、D90 等參數(shù)在批次間的變化情況。

（六）生物學活性應(yīng)如何開展研究？

  生物學活性是對藥物的特性、質(zhì)量以及批間一致性進行研究和評價的重要指標。一般而言，生物學活性檢測方法的設(shè)計應(yīng)盡可能反映樣品的臨床作用機制。然而，由于EVs 在理化性質(zhì)、組成成分等方面具有異質(zhì)性，同時部分EVs 作用機制較為復(fù)雜，鼓勵申請人在早期研究階段盡可能全面地探索藥物的潛在作用機制，并建立多維度的檢測體系，以系統(tǒng)描述其生物學活性特征。在方法構(gòu)建過程中，可綜合運用多種技術(shù)手段進行多維度評價，例如：基于生化原理的活性檢測、基于細胞的生物學活性檢測等。為進一步提升活性指標的特異性，可考慮基于顆粒數(shù)量等指標進行標準化處理，從而初步表征EVs藥物的特異性的生物活性。在方法開發(fā)過程中，建議關(guān)注劑量-反應(yīng)關(guān)系的建立、動物種屬選擇的相關(guān)性等因素，并合理設(shè)置對照組，如采用合理 EVs陰性對照（如失活EVs、培養(yǎng)體系引入的EVs等）以排除背景信號及共分離成分的干擾。建議在開展臨床試驗申請前完成方法學的初步驗證，以確保檢測結(jié)果的可靠性、重復(fù)性和科學性。

   對于裝載的活性成分或靶向分子較為明確的EVs，建議關(guān)注裝載分子本身以及裝載完成后EVs的生物學活性，如裝載的目的基因的序列分析，表達產(chǎn)物的分析和目的基因表達產(chǎn)物的生物學活性研究等；靶向分子與受體的結(jié)合活性、親和力等；完整EVs與靶細胞的識別、膜融合、活性分子相應(yīng)的生物學功能等。

（七）臨床試驗階段EVs藥物質(zhì)量標準控制項目的一般要求？

  EVs藥物質(zhì)量標準的制定可參考ICHQ6B的基本原則，同時結(jié)合EVs固有特點、藥物給藥途徑、生產(chǎn)工藝能力、質(zhì)量研究數(shù)據(jù)、非臨床及臨床研究結(jié)果綜合評估，核心目的是保證藥物的安全性、有效性及質(zhì)量批間一致性。在臨床試驗申報階段，EVs藥物的質(zhì)量標準項目建議考慮以下指標：形態(tài)、粒徑及其分布（應(yīng)報告分布參數(shù)）、含量/顆粒數(shù)、鑒別（標志物）、純度（顆粒蛋白比例、完整顆粒比、目標顆粒比等）、生物學活性、藥物和工藝相關(guān)雜質(zhì)、微生物安全性（無菌、內(nèi)毒素、支原體、外源病毒（如適用））、一般檢測（外觀、pH值、可見異物、滲透壓摩爾濃度、裝量）等。在制定質(zhì)量標準時，建議對所選檢測方法的科學性和適用性予以適當說明。針對粒徑及顆粒數(shù)等關(guān)鍵質(zhì)量屬性，建議采用多維度互補檢測方式進行檢測，避免過度依賴單一分析平臺。隨著臨床研究的推進、對藥物特性研究的不斷深入、生產(chǎn)工藝的優(yōu)化及檢測技術(shù)的進步，持續(xù)完善質(zhì)量標準。

（八）臨床試驗階段，EVs藥物穩(wěn)定性研究的一般考慮？

  穩(wěn)定性研究內(nèi)容一般應(yīng)包括影響因素試驗（如適用）、加速試驗、長期試驗、運輸試驗及臨床使用中穩(wěn)定性試驗。試驗樣品應(yīng)涵蓋代表性原液及制劑，其生產(chǎn)過程和質(zhì)量屬性應(yīng)能代表實際臨床試驗用樣品的生產(chǎn)情況。除一般研究內(nèi)容外，穩(wěn)定性研究還建議結(jié)合制劑處方研究、制劑工藝開發(fā)和臨床給藥方式等進行針對性設(shè)計。

一方面，可通過穩(wěn)定性研究對比不同緩沖體系和冷凍保護劑對EVs藥物的保護效果，為制劑處方優(yōu)化提供數(shù)據(jù)支持；另一方面，若藥物臨床使用前需進行稀釋等操作，必須評估使用期間EVs藥物在相關(guān)介質(zhì)中的粒徑、完整性及活性維持情況 確保臨床給藥窗口期的安全有效。

在穩(wěn)定性試驗條件設(shè)置上，需充分考慮EVs藥物質(zhì)量特性和敏感的考察指標。例如，影響因素試驗可重點考察高溫、光照、劇烈振蕩及反復(fù)凍融對EVs藥物粒徑、膜完整性及功能活性的影響。加速試驗應(yīng)充分考慮EVs藥物脂質(zhì)結(jié)構(gòu)在特定溫度條件下可能發(fā)生的物理狀態(tài)改變（如膜完整性變化、EVs 顆粒的膜融合等），這些變化可能顯著影響EVs藥物的結(jié)構(gòu)完整性。

對于凍干制劑，還應(yīng)評估復(fù)溶后的穩(wěn)定性。此外，運輸試驗應(yīng)模擬實際振動強度，臨床使用中穩(wěn)定性則需評估EVs藥物與輸液容器、稀釋液配伍后的放置時限及相容性。由于EVs藥物潛在的作用機制復(fù)雜，基于不同的臨床適應(yīng)癥，其制劑類型也復(fù)雜多樣，不同制劑類型在穩(wěn)定性考察時應(yīng)同時結(jié)合臨床應(yīng)用場景合理設(shè)置考察條件。穩(wěn)定性考察項目的選擇應(yīng)結(jié)合品種特點，質(zhì)量屬性與臨床安全性有效性的相關(guān)性，采用正交分析方法全面監(jiān)測質(zhì)量變化。理化穩(wěn)定性方面，通常需關(guān)注顆粒數(shù)、粒徑分布、聚集趨勢、膜完整性及表面電荷變化，這些指標可在一定程度上反映EVs藥物的囊泡結(jié)構(gòu)完整性和均一性。此外，應(yīng)考慮功能性輔料在保存期間的變化是否可能破壞EVs藥物結(jié)構(gòu)并影響藥物活性。生物學穩(wěn)定性方面，盡可能追蹤效價標志物含量及生物學活性，確保藥物功能成分在儲存期內(nèi)不丟失，同時監(jiān)測純度及微生物安全性指標，保障臨床用藥安全。

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